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簡要描述：BCA法蛋白抽提定量實(shí)驗(yàn)BCA（Bicinchoninic acid）法是一種常用的蛋白質(zhì)定量方法，它基于蛋白質(zhì)在堿性條件下能夠?qū)~離子（Cu^2+）還原為亞銅離子（Cu^+），隨后BCA與Cu^+形成穩(wěn)定的紫色復(fù)合物，該復(fù)合物在562nm處具有強(qiáng)烈的吸光度，其吸光度與蛋白質(zhì)濃度呈正比。
更新時間：2024-10-15瀏覽次數(shù)：866詳細(xì)介紹
BCA法蛋白抽提定量實(shí)驗(yàn)步驟
BCA（Bicinchoninic acid）法是一種常用的蛋白質(zhì)定量方法，它基于蛋白質(zhì)在堿性條件下能夠?qū)~離子（Cu^2+）還原為亞銅離子（Cu^+），隨后BCA與Cu^+形成穩(wěn)定的紫色復(fù)合物，該復(fù)合物在562nm處具有強(qiáng)烈的吸光度，其吸光度與蛋白質(zhì)濃度呈正比。
以下是使用BCA法蛋白抽提定量實(shí)驗(yàn)的基本步驟：
1.配制標(biāo)準(zhǔn)品和工作液：
配制不同濃度的牛血清白蛋白（BSA）標(biāo)準(zhǔn)品溶液，通常線性范圍為20-2000 μg/mL。
配制BCA工作液，將BCA試劑A和BCA試劑B按50:1的比例混合。
2.樣品處理：
如果需要，對蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)某樘岷拖♂尅?/p>
3.加入BCA工作液：
向含有標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品的微孔板或試管中加入BCA工作液，樣品與工作液的體積比通常為1:20。
4.孵育：
將微孔板或試管在37°C下孵育30分鐘，以促進(jìn)顏色的發(fā)展。
5.冷卻和讀取吸光度：
孵育結(jié)束后，讓樣品冷卻至室溫。
使用酶標(biāo)儀在562nm波長處測定樣品的吸光度。
6.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：
根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算樣品中蛋白質(zhì)的濃度。
注意事項(xiàng)：
確保所有試劑在使用前充分混合且在推薦的溫度下存儲。
嚴(yán)格按照試劑添加順序和操作步驟進(jìn)行，避免任何步驟的顛倒或省略。
實(shí)驗(yàn)中應(yīng)包括空白對照，以消除試劑本身的吸光度貢獻(xiàn)。
以上步驟綜合了多個搜索結(jié)果中的信息。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時，應(yīng)遵循最新的實(shí)驗(yàn)指南和制造商的具體指示，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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